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北京中科光析科学技术研究所第三方生物实验中心能够进行6686体育,拥有多个种类的生物实验室,包含生物小鼠、大鼠、裸鼠、豚鼠、兔类、鱼类、犬类等多种类动物,能够建立诱发型动物模型、遗传工程动物模型、生物医学动物模型、阴性动物模型等多种生物模型。

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特发性血小板减少性紫瘢模型,是构建的特发性血小板减少性紫瘢(ITP)模型。

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特发性血小板减少性紫瘢小鼠模型的基本过程可分为如下几步:

A. 采用 BALB/c 小鼠,8 周龄,体重 18-22 g, 雌雄均可;豚鼠大于 3 月龄,雄雌不拘;

B. 豚鼠抗小鼠血小板抗血清的制备: BALB/c 小鼠乙酸麻醉后,从心脏取全血置于 EDTA-Na2 抗凝管内,分离血小板并洗涤,用生理盐水稀释成混悬液;取上述血小板混悬液,分别与等量完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂混合成油包水状,制备抗原。取含弗氏佐剂抗原于 0 周注射豚鼠足掌、背及腹部皮下至少 4 点;取含不完全弗氏佐剂抗原,分别于 0 周、4 周注射于豚鼠足掌、背及腹部皮下,每次至少 4 点,第 5 周从豚鼠心脏取不抗凝全血,离心后取上层血清,即为豚鼠抗小鼠血小板抗血清 (CP-APS) 随后用 BALB/c 小鼠红细胞吸附至少两次,用生理盐水稀释成不同浓度的 GP-APS。储存于 -20 °C 冰箱待用。

C.ITP 小鼠模型建立:急性短期 ITP 模型:于 BALB/c 小鼠腹腔内注射抗血清 (100 µl), 造成小鼠一过性血小板减少。慢性持续性 ITP 模型:于 0、1、2、4、6 天分别于小鼠腹腔注射 APS, 每次 100 µl, 造成小鼠慢性持续性血小板减少。

特发性血小板减少性紫瘢兔模型的基本过程可分为如下几步:

A. 采用新西兰白兔,雄雌均可,体面 2-4 kg;豚鼠,大于 3 月龄均可,雌雄不拘;

B. 豚鼠抗兔血小板血清的 (GP-APs) 制备用苯巴比妥钠 (30 mg/kg) 从耳缘静脉注射麻醉兔,按(V/V)从兔颈动脉取全血与酸性枸橼酸右旋糖 (acid citrate dextrose, ACD) 混合, pH 4.5,经离心,分离血小板并洗涤,用生理盐水稀释制成混悬液。用上述血小板混悬液 (109 个血小板)注入豚鼠腹腔,此后每 1 个月注射次,连续 2 次,共注射 3 次 (3 X 109 个血小板)。未次注射后的第 6 天,从豚鼠心脏穿刺取血,离心后取上层血清,随即分别用等量 1:1(V/V) 兔压紧红细胞和洗涤过的兔淋巴细胞各吸附血清一次,用生理盐水稀释,即为豚鼠抗兔血小板抗血清,分装后储存于 -70 °C 冰箱待用、按 ELISA 法和放射免疫沉淀法检测抗血清效价;

C. 兔 ITP 模型的建立:急性短期兔 ITP 模型:苯巴比妥钠麻醉兔,插入颈动脉套管后。耳缘静脉注射豚鼠抗兔血小板血清(根据抗血清效价与降血小板之间的量效关系.确定抗血清的注射量)。间隔 15 分钟、从颈动脉套管取全血注入装有 EDTA 的管内做血小板计数,在注射后的 90 分钟,再从颈动脉套管取血,置于装有 ACD 试管内,测定血小板结合的免疫球蛋白(PA IgG);

D. 慢性持续性兔 lTP 模型:方法同上,于 0,1,2,4,6,8 天分别从耳缘静脉注射豚鼠抗兔血小板血清 (CP-APS)。在末次注射后分别在 15 分钟和 90 分钟取血做血小板计数及检测 PA IgG,GP-APS 的注射量和次数可根据血小板计数的结果进行调整。

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